期刊简介
中国科协主管，中华医学会主办。本刊是传染病、 寄生虫病专业学术期刊。主要报道传染病与寄生虫病（包括临床各科内各种感染性疾病）领域领先的科研成果和临床诊疗经验及与传染科临床密切结合的基础理论研究，交流中医、中西医结合的临床经验，介绍新理论、新方法、新技术和国际上有关传染病（感染性疾病）研究的新进展。主要设有述评、专论、基础论著、临床论著、综述、讲座、临床病理（病例）讨论、国际交流、病例报告、会议纪要及国内外学术动态等栏目。主要读者对象为广大的传染病（感染病）科医师。
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首页>中华传染病杂志
- 杂志名称：中华传染病杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1000-6680
- 国内刊号：31-1365/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
HBsAg基因与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4单链抗体的真核质粒载体构建及表达蛋白活性鉴定
彭国平；赵冬久；周承；周林福；陈智
关键词：基因, 病毒, 肝炎表面抗原, 乙型, 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原, 基因表达, 质粒, 免疫活性
摘要：目的 构建HBsAg基因(HBV S)与抗鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)单链抗体(ScFv)的真核质粒载体,并检测融合表达蛋白特异性抗原的结合活性.方法 将CTLA-4单链抗体的真核表达质粒pSect2/ScFv4F10及含HBV S基因的质粒pSect2/S分别经SfiI和HindⅢ双酶切后,S基因片段进一步克隆至质粒pSect2/ScFv4F10中.将质粒pSect2/ScFv40、pSect2/S-ScFv4F10转染中华仓鼠卵巢细胞,Western印迹法检测目的蛋白的表达.将表达的蛋白经超滤浓缩与亲和层析纯化后,分别通过竞争抑制ELISA和表面等离子共振(SPR)技术,检测其与重组小鼠CTLA-4抗原的结合活性及亲合常数.采用One-way ANOVA比较组间差异.结果 成功构建可稳定表达S-ScFv4F10蛋白的真核质粒载体pSect2/S-ScFv4F10.十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹法检测表明,其表达蛋白的相对分子质量约为52×103.当将抗鼠CTLA 4的亲本单链抗体4F10浓度固定时,其与CTLA-4纯化抗原混合反应的吸光度(A)570值随ScFv融合蛋白比例的减少而逐步增大;且当ScFv、S-ScFv4F10与4F10单链抗体以摩尔比为2∶1混合时,其对4F10结合抗原的竞争抑制率分别可达到72.6％和64.5％;亲本单链抗体、ScFv4F10、S-ScFv4n0与重组CTLA-4抗原的结合平衡常数KA值分别为7.29×108mol/L、9.52×106mol/L和2.04×106mol/L,解离平衡常数KD分别为1.40×10-9mol/L、1.05×10-7mol/L和4.91×10-7mol/L.结论 成功构建了HBV S基因与CTLA-4单链抗体ScFv4F10的真核表达质粒载体pSect2/S-ScFv4F10,其表达的蛋白与CTLA-4抗原具有一定的亲和活性.
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